产品货号:
KL221150
中文名称:
酵母质粒DNA纯化试剂盒
英文名称:
Yeast Plasmid DNA Purification Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是专门用于提取酵母质粒DNA的试剂盒(不适用于酵母dsRNA质粒)。是根据酵母细胞壁十分坚硬的特点,在细菌质粒碱裂解法的基础上,增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤,可在1小时左右得到可以用于PCR或转化酵母质粒DNA。
- 即开即用,经济实惠,客户自己不需要准备额外的试剂。
- 实验快速,整个过程只需要一个小时左右,可同时处理多个样品。
- 得到的酵母质粒DNA纯度高,可直接用于转化和PCR等实验。
- 可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒DNA。
- 安全,不需使用玻璃珠、酚、氯仿等试剂。
- 每5~10mL酵母培养液一般可以提取到1μg左右的高拷贝酵母质粒DNA。
- 酵母质粒DNA纯化溶液C中有蓝色染料,便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况,保证实验效果。
组分 | 规格 |
酵母质粒DNA纯化溶液A | 30mL |
酵母质粒DNA纯化溶液B | 13mL |
酵母质粒DNA纯化溶液C | 13mL |
酵母质粒DNA纯化溶液D | 18mL |
破壁酶 | 50mg |
RNase A溶液(10mg/mL) | 150μL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL |
DNA洗脱液 | 10mL |
保存:室温,其中破壁酶和RNase A需置于-20℃,有效期1年。
- 将5~10mL酵母过夜液体培养物分多次转移到1.5mL塑料离心管中。每转移一次后,需要14000×g室温离心1分钟,然后吸弃液体培养基。
- 不要使用培养时间超过16小时的酵母液体培养物,否则质粒DNA产量偏低。
- 不要使用超过10mL的酵母液体培养物,否则破壁不充分,降低质粒DNA产量。
- 不要使用培养时间超过16小时的酵母液体培养物,否则质粒DNA产量偏低。
- 加入1mL自备的无菌水,充分震荡混匀,14000×g室温离心1分钟,吸弃上清。
- 加入600μL酵母质粒DNA纯化溶液A,充分震荡细胞沉淀重悬,95℃保温10分钟。
- 14000×g室温离心1分钟,弃上清液。
- 加入250μL含破壁酶的酵母质粒DNA纯化溶液B,吹打混匀。
- 配制方法是将本试剂盒提供的50mg粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13mL酵母质粒DNA纯化溶液B的塑料瓶中,轻柔摇晃混匀后使用。
- 未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存,否则破壁酶很容易失去活性。
- 配制方法是将本试剂盒提供的50mg粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13mL酵母质粒DNA纯化溶液B的塑料瓶中,轻柔摇晃混匀后使用。
- 37℃保温30分钟,延长保温时间到60分钟有利于细胞壁的裂解。
- 放置较长时间后,酵母质粒DNA纯化溶液B中的裂壁酶会逐渐失活,额外再加入一些裂壁酶(如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme等,总浓度为1mg/mL)可以极大提高产量。
- 将离心管放冰浴冷却后,加入250μL酵母质粒DNA纯化溶液C,轻轻颠倒混匀溶液蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠,然后室温放置5~10分钟。
- 不要剧烈震荡,否则基因组DNA将断裂并污染质粒DNA。
- 加入350μL酵母质粒DNA纯化溶液D,轻轻颠倒混匀几次,溶液由蓝色变成无色,将有白色絮状沉淀产生,然后冰浴放置10~30分钟(如果质粒较长,最好放置30分钟)。
- 14000×g室温离心6~10分钟,将上清液转移到离心吸附柱中。
- 不要将漂浮在液面的沉淀物(如果有的话)转移到离心吸附柱中。上清液可以分多次转移。
- 室温下放置至少2分钟以让质粒DNA充分结合到离心吸附柱上。
- 14000×g室温离心1分钟,弃穿透液。
- 将500μL通用洗柱液加入离心吸附柱中,14000×g室温离心1分钟,弃穿透液。
- 重复上步操作一次。
- 14000×g室温离心1分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略,否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR和转化实验。
- 将离心吸附柱套在一干净的1.5mL塑料离心管中,加入30~100μL DNA洗脱液(加入的量取决于预期的DNA浓度)至离心吸附柱的膜的中央。
- 室温下放置至少2分钟。
- 14000×g室温离心1分钟以洗脱DNA。
- 如有必要,可以再加入适量DNA洗脱液洗出残留的DNA。第二次洗脱得到的DNA的产量约为第一次的30~50%。
- 不要将已经洗脱的、含DNA的溶液再加上去。
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